Cтраница 1
Физические свойства S-сульфопротеинов сходны со свойствами других производных тех же белков, в которых дисульфидные связи расщеплены и превращены в анионные группы. Некоторые сульфо-протеины обладают сильной тенденцией к агрегации и могут удерживаться в растворе только при строго определенных условиях рН и ионной силы. Сравнительно легкое отщепление сульфонатной группы обсуждается ниже в связи с вопросом о регенерации актив-лого инсулина из двух его разделенных пептидных цепей. [1]
Субтилизин, специфичность 126 Судан черный 251 S-Сульфопротеины 106 и ел. [2]
Установлено, что различные белки неодинаково реагируют с сульфитом, и условия, необходимые для полного превращения белка в S-сульфопротеин, несколько различны от случая к случаю. Реакция с химотрипсиногеном протекает очень быстро на воздухе при 38 без добавления дополнительного окислителя. Наряду с этим, чтобы довести до конца превращение рибонуклеазы в S-сульфопротеин, необходимо присутствие окислителя и концентрированного раствора мочевины. Скорости реакции сульфита и тетратионата с SS - и соответственно SH-группами большинства пептидов и некоторых белков значительно выше, чем скорость, с которой протекает реакция взаимодействия между этими двумя соединениями. Рекомендуется следить при помощи амперометриче-ского титрования за ходом процессов восстановления и окисления каждого индивидуального белка. Образование SH-групп при действии сульфита на цистин и окисленный глутатион, а также на рибонуклеазу и химотрип-синоген показано на фиг. [3]
Начиная с ранних наблюдений Хефтера в 1907 г. [31] многие исследователи изучали реакцию сульфита с белками, но в настоящее время внимание сосредоточено на возможности превращения всех цистеиновых и цистиновых групп в белках в S-сульфонатные группы. Для удобства вместо цистеинсульфоновая кислота говорят S-сульфоцистеин, а белки, содержащие такие группы, называют S-сульфопротеинами. [4]
Установлено, что различные белки неодинаково реагируют с сульфитом, и условия, необходимые для полного превращения белка в S-сульфопротеин, несколько различны от случая к случаю. Реакция с химотрипсиногеном протекает очень быстро на воздухе при 38 без добавления дополнительного окислителя. Наряду с этим, чтобы довести до конца превращение рибонуклеазы в S-сульфопротеин, необходимо присутствие окислителя и концентрированного раствора мочевины. Скорости реакции сульфита и тетратионата с SS - и соответственно SH-группами большинства пептидов и некоторых белков значительно выше, чем скорость, с которой протекает реакция взаимодействия между этими двумя соединениями. Рекомендуется следить при помощи амперометриче-ского титрования за ходом процессов восстановления и окисления каждого индивидуального белка. Образование SH-групп при действии сульфита на цистин и окисленный глутатион, а также на рибонуклеазу и химотрип-синоген показано на фиг. [5]
Первона - ч альное восстановление дисульфидных связей проводят путем добавления 0 62 мл 1 0 М раствора Na2SOs ( или 1 25 мл 0 5 М Na2SO3 в 8 М мочевине) при рН 7 4 в течение 10 мин. Освобождающиеся SH-группы затем вновь окисляют, добавляя либо 1 25 мл 0 5 М раствора иодозобензоата в 8 М растворе мочевины, либо 1 25 мл 0 5 М тетратионата Na в 8 М растворе мочевины. Через 10 мин повторяют обработку раствора белка сульфитом Na и завершают циклы окислительно-восстановительных процессов. S-сульфопротеин выделяют из обессоленного раствора путем лиофилизации. [6]