Анализ - физиологическая жидкость
Cтраница 1
 |
Двухколоночный анализ стандартной смеси аминокислот на базовом аминокислотном анализаторе. [1] |
Анализ физиологических жидкостей ( плазмы крови, мочи, экстрактов тканей млекопитающих) проводят на длинной колонке ( 150 см) в несколько иных условиях. Эффективность разделения возрастает благодаря длительному ( 11 ч, 330 мл) элюи-рованию буферным раствором с рН 3 25 при 30 С. [2]
Метод анализа физиологических жидкостей в действительности является расширенным вариантом метода анализа белковых гидролизатов; он позволяет разделить более 50 аминокислот или родственных соединений, тогда как по методу анализа белковых гидролизатов удается определить 20 обычных аминокислот. Поэтому при выборе метода анализа нужно принимать во внимание не источник взятия пробы, а ее подлинность и состав. Пробный анализ следует проводить по такой методике, чтобы можно было полностью количественно определить все аминокислоты, которые предполагаются в пробе. [3]
Имеется вторая схема анализа, которая обеспечивает лучшее разделение аминокислот при анализе физиологических жидкостей и дает возможность анализировать большее число аминокислот. [4]
Сравнительно недавно синтезирована смола типа UR-40, которая позволяет определять кислые и нейтральные аминокислоты по методике анализа физиологических жидкостей за 170 мин на колонке высотой 26 см. Основные аминокислоты физиологических жидкостей также могут быть определены на этой же колонке за 210 мин. Одноколоночный метод анализа белковых гидролизатов на этой смоле описан в разд. Использование более коротких колонок и улучшение разделения пиков аминокислот стало возможным благодаря устранению специфических перемешивающих узлов ( таких, как реактор, подводящие трубки, краны и кюветы), имеющихся в большинстве приборов. [5]
Разрабатываемые методики анализа этих соединений предполагают использование классических двухколоночных систем ( сильно удерживаемые соединения основного характера анализируют на короткой колонке, а соединения нейтрального и кислотного характера - на длинной колонке), а также систем с одной колонкой. Сначала рассмотрим два примера процедур, предназначенных для ускорения анализов физиологических жидкостей на короткой и длинной колонках, а далее приведем пример разработки очень быстрой одноколоночной методики анализа аминокислот, содержащихся в продуктах гидролиза. [6]
В этом разделе мы рассмотрим две такие системы, применяемые для анализа физиологических жидкостей, чтобы показать, что методом ионообменной хроматографии можно проводить разделение очень сложных смесей. На рис. 8.9 показан анализатор для веществ, поглощающих в ультрафиолетовой области, а на рис. 8.10 - анализатор углеводов, содержащихся в физиологических жидкостях. [7]
В этом разделе мы рассмотрим две такие системы, применяемые для анализа физиологических жидкостей, чтобы показать, что методом ионообменной хроматографии можно проводить разделение очень сложных смесей. На рис. 8.9 показан анализатор для веществ, поглощающих в ультрафиолетовой области, а на рис. 8.10 - анализатор углеводов, содержащихся в физиологических жидкостях. [8]
Существует два основных метода, пригодных для хромато-графического анализа аминокислот. Один метод предназначен для анализа аминокислот белковых гидролизатов, другой - для анализа физиологических жидкостей. Описание этих методов приведено ниже. [9]
При анализе физиологических жидкостей основная задача состоит в том, чтобы разделить все имеющиеся компоненты на одной колонке и определить объемы их выхода в идентичных условиях, В связи с этим следует отметить работу Гамильтона [41], в которой указаны объемы выхода 180 веществ. Эти данные можно использовать для идентификации компонентов физиологических жидкостей, а также для выбора условий анализа нингидринположительных веществ природных смесей. [10]
Спакман, Стейн и Мур [12] предложили метод анализа кислых и нейтральных аминокислот на колонке размером 150 X X 0.9 см при использовании двух буферов, заменяемых один на другой в середине анализа. Для анализа основных аминокислот, обычно встречающихся в пептидных и белковых гидролизатах, применяется колонка размером 15 X Х0 9 см. По этой методике для каждой колонки требуется отдельная проба; однако методика иметвт большие возможности. Так, если необходимы сведения только о нескольких основных аминокислотах, например, в случае анализа физиологических жидкостей, то они могут быть получены без предварительного элюирования кислых и нейтральных аминокислот, которые при одноколоночном методе элюируются в первую очередь. [11]
Этому способствовало также совершенствование и создание сферических ионообменных смол, которые используются в специальных хроматографических системах. Улучшенные смолы дают возможность использовать более короткие колонки при сохранении достаточного числа теоретических тарелок, которое позволяет разделять большое количество различных аминокислот, хроматографируемых обычно по более сложной методике анализа физиологических жидкостей. Так, реальностью стал анализ кислых и нейтральных аминокислот более сложных физиологических жидкостей, приблизившийся по времени к анализу простых белковых гидролиза / тов. [12]
Страницы: 1