Загрузка - колонка
Cтраница 1
Загрузка колонки была достаточно высокой, в пределах 1 - 8 г. Для сорбатов с а 1 4 наблюдалось практически количественное разделение образцов массой в несколько грамм. Это позволило разделить за один проход 50 г рацемического метилового эфира Н - ( 2-нафтил) ала-нина на большой препаративной колонке с 13 кг хирального сорбента. [1]
Загрузку колонки начинают, помещая в суженную часть колонки тампон из стекловаты, затем слой ( 2 - 3 см) дробленого кварца, предварительно промытого горячей дистиллированной водой. На дробленое кварцевое стекло помещают слой аниони-та, покрывают его тампоном из стекловаты, затем помещают слой катионита, вновь слой ( 2 - 3 см) дробленого кварца и покрывают тампоном из стекловаты. По мере обработки иони-ты выгружают из колонки и регенерируют, как описано выше. [2]
 |
Переход от условий ТСХ к условиям колоночной хроматографии9 [ 16J. [3] |
Допустимую загрузку колонки, согласно Снайдеру [59], определяют следующим образом: если допустимая нагрузка на тонкий слой равна х граммов на одно пятно, то в колонку можно соответственно загрузить х / ( 100 f) граммов пробы в расчете ла грам м сорбента. [4]
Если загрузка колонки уранил-ионами не превышает 25 %, получают 100 % - ый выход радиохимически чистого церия. [5]
После загрузки колонки необходимо установить скорость течения сквозь нее жидкости и величину градиента концентрации растворителя в его смеси с осадителем; значение каждого из этих параметров может быть решающим для успеха фракционирования. Скорость течения определяется молекулярным весом полимера; для фракционирования полимеров большего молекулярного веса она должна быть низкой. При фракционировании полистирола А ( [ т ] ] 2 18) скорость течения не должна превышать 5 мл / час, а при фракционировании полистирола В ( [ т) ] 0 64) удовлетворительные результаты были достигнуты при скорости течения 12 мл / час. Оптимальную скорость можно найти только экспериментальным путем, постепенно понижая скорость течения до такой, при которой не происходит дальнейшего улучшения разделения на фракции. [6]
После загрузки колонки включают обогрев колбы и доводят жидкость до кипения. Одновременно включают небольшой обогрев колонки. После этого, увеличивая обогрев колонки, доводят число капель, стекающее с верхнего капельника, до 100 капель / мин. Режим работы колонки периодически контролируют, подсчитывая величину флегмы и величину орошения. Показания ЛАТРов и амперметров, отвечающие нагреву колбы и обогреву колонки при нормальном режиме работы колонки, записывают в рабочую тетрадь. [7]
Для загрузки колонки берут 10 - 12 г сухого силикагеля, помещаемого в фарфоровую чашку и прибавляют к нему небольшими порциями при постоянном помешивании 10 - 11 мл воды до получения массы, частицы которой слипались бы между собой, но не прилипали к стенкам чашки. Увлажненный силика-гель сразу заливают бензолом для предохранения от влияния воздуха и тщательно перемешивают. [8]
При обессоливании загрузка колонок раствором составляет обычно 10 - 25 % ( иногда до 30 - 40 %) от объема набивки, независимо от концентрации вещества в растворе. [9]
Указывается, что загрузку колонки размером 0 46 X 25 см можно доводить до 50 мг ( на примере рибонуклеазы) без ухудшения разрешения белковых пиков. В опубликованном годом позже обзоре по ЖХВД белков fRegnier, Gooding, 1980 ], в разделе, посвященном обратнофазовой гидрофобной хроматографии, не содержится существенно новых элементов, кроме указания на целесообразность использования ион-парного варианта такой хроматографии, о чем было достаточно сказано выше. В частности, рекомендуется использовать ТЭА-фосфатный буфер в сочетании с градиентом концентрации пропанола. [10]
 |
Оптимальные значения рН при разделении легких лантаноидов с помощью 0 25 М кислоты при двух разных температурах. [11] |
Важным фактором является также загрузка колонки. При увеличении количества лантаноидов, подлежащих разделению, наблюдается постепенное уширение пика, приводящее к ухудшению разделения. Уширение становится особенно заметным, когда загрузка колонки превышает 5 - 10 мг смеси элементов на 1 см2 сечения колонки. В этом случае происходит удовлетворительное разделение двух соседних лантаноидов. [12]
Количество применяемой жидкой фазы ( загрузка колонки) зависит от различных факторов и может составлять 1 - 25 вес. Применение большого количества жидкой фазы имеет два преимущества. Первое заключается в устранении остаточной активности носителя ( образования хвостов), второе - в возможности использования большей пробы. Но, помимо этих преимуществ, имеются и недостатки. Уменьшается число ступеней разделения; кроме того, возрастает продолжительность анализа. Поэтому лучше работать, применяя небольшие количества жидкой фазы, особенно при возможности простой дезактивации носителя и наличии чувствительных детекторов. [13]
Количество применяемой жидкой фазы ( загрузка колонки) зависит от различных факторов и может составлять 1 - 25 вес. Применение большого количества жидкой фазы имеет два преимущества. Первое заключается в устранении остаточной активности носителя ( образования хвостов), второе - в возможности использования большей пробы. Но, помимо этих преимуществ, имеются и недостатки. Уменьшается число ступеней разделения; кроме того, возрастает продолжительность анализа. Поэтому лучше работать, применяя небольшие количества жидкой фазы, особенно при возможности простой дезактивации носителя и наличии чувствительных детекторов. [14]
Представляет интерес наблюдение авторов, то при умеренной загрузке колонки разделение белков в отличие от низкомолекулярных соединений мало зависит от длины колонки. Аналогичное наблюдение было сделано в цитированной выше работе Махони. [15]
Страницы: 1 2 3 4