Cтраница 1
Трис-ацетатный буфер - 0 4 М раствор, рН 7 6: 0 2 моль трис, 0 1 моль ацетата натрия и 0 01 моль ЭДТА растворяют в прокипяченной воде, добавляют концентрированной СН3СООН до-р Н 7 6 и доводят водой до 500 мл. [1]
К смеси 2 2 г акриламида и 0 12 г метиленбисакриламида добавляют 33 мл трис-ацетатного буфера рН 7 8, 50 мл прокипяченной Н2О, 0 075 мл ТЕМЕД, 16 мл 0 5 % - ного раствора персульфата аммония. [2]
После окончания полимеризации буфер с поверхности геля отсасывают и наносят образцы РНК, полученные одним из описанных выше методов, в объеме 0 01 - 0 05 мл. Раствор РНК разводят электродным буфером до концентрации 2 мг / мл и добавляют равный объем 40 % - ного раствора сахарозы. В электродные камеры заливают трис-ацетатный буфер ( рН 7 8), разведенный в 3 раза. Для предотвращения денатурационных изменений РНК разделение рекомендуется проводить при 4 С. [3]
Этот прием применяется сейчас относительно редко, поэтому ограничимся одним примером. Таким образом были очищены амино-ацил - тРНК синтетазы из печени крысы. К супернатанту после высокоскоростного центрифугирования гомогената клеток в 0 1 М Трис-ацетатном буфере ( 100 OOOg; 1 5 ч) добавляли Alumina CT из расчета 0 4 мг на 1 мг белка и перемешивали в течение 20 мин. [4]