Флуоресцентное измерение
Cтраница 1
Флуоресцентные измерения обладают рядом преимуществ в сравнении с абсорбционными. В частности, оптическое поглощение промежуточного продукта, содержащегося в низкой концентрации, вызывает незначительное изменение относительно большой интенсивности зондирующего пучка. Шум, получающийся вследствие случайных флуктуации интенсивности света, а также из-за статистической природы пучка фотонов, ограничивает чувствительность, достижимую в абсорбционном эксперименте. В люминесцентном эксперименте, напротив, нет излучения кроме того, которое испускается возбужденными соединениями. Статистические ограничения продолжают лимитировать точность, с которой могут измеряться концентрации, но достижимая на практике предельная чувствительность люминесцентного эксперимента обычно значительно выше, чем абсорбционного. По этой причине люминесценция часто используется для изучения веществ, первоначально находящихся в основном состоянии, путем специального оптического возбуждения их в более высокое люминесцентное состояние. Поскольку флуоресценция изотропна, ее можно регистрировать под углом к направлению возбуждающего пучка. [1]
Воспроизводимость флуоресцентных измерений на двух различных приборах равна 1 9 - 3 6 % и 2 - 5 % соответственно на одной хроматограмме и 7 5 - 9 1 % - на различных хроматограммах. [2]
Повышение избирательности флуоресцентных измерений может достигаться при использовании нелинейного поглощения ( см. стр. В условиях, когда поглощение уменьшается вследствие эффекта насыщения, флуоресценция тоже должна уменьшаться. Атомы или молекулы, движущиеся перпендикулярно лазерному лучу, испытывают нелинейное взаимодействие с обеими волнами. Однако эти резонансы имеют вид небольших пиков на сильном фоне. Возможно, что использование интермодуляционной флуоресценции при низких ( порядка 0 01 кПа) давлениях в кювете позволит без больших затрат решить проблему измерения концентраций сложных молекул типа СбН6 в присутствии других сложных молекул, поглощающих в том же спектральном интервале. [3]
Кюветы для флуоресцентных измерений изготовляются с учетом того, что флуоресценция фиксируется под большим углом, обычно 90 от направления пучка возбуждающего излучения. [5]
Аппаратура для флуоресцентных измерений может состоять из обычного спектрофотометра и флуоресцентной приставки [ 1131 или это может быть специально изготовленный флуориметр. Возбуждение обычно производится с помощью пучка света ( монохроматического или с некоторой полосой частот) высокой интенсивности, который проходит через кювету перпендикулярно направлению измерения флуоресценции. Изготовление кювет для флуоресцентных исследований было кратко описано в разд. [6]
Во всех типах флуоресцентных измерений относительные квантовые выходы флуоресценции можно определить с большей точностью, чем абсолютные. Абсолютные квантовые выходы флуоресценции многих соединений были определены с достаточной точностью в нескольких лабораториях, и они могут быть использованы как актинометры при вычислении квантовых выходов других соединений. Например, в отсутствие концентрационного тушения и тушения кислородом в растворах, достаточно разбавленных во избежание перекрывания полос флуоресценции и поглощения, рубрен в гексане или 1-нафтиламин - 4-сульфонат натрия в глицерине или этилен-гликоле имеют квантовый выход флуоресценции, близкий к единице, и могут служить хорошими стандартами. [7]
Растворы, используемые для флуоресцентных измерений, не должны содержать пыли, соринок и других рассеивающих свет частиц. [8]
При выборе фотоумножителей для флуоресцентных измерений наибольшее значение имеют их оптический вход, материал и площадь фотокатода, интегральная чувствительность и тем-новой ток. [9]
При отсутствии подходящих микроамперметров для флуоресцентных измерений можно пользоваться и гальванометрами типа М195 ( или Ml 17), но следует иметь в виду, что их шкалы не градуированы в микроамперах; цена их делений по току, выраженная в а / дслХЮ - д, приводится в паспорте приборов. [10]
Ясно, что нельзя получить премуществ, если флуоресцентные измерения страдают от рассеяния. [11]
В последней работе приведены примеры каждого из трех способов использования флуоресцентных измерений для определения молярного отношения металла в хелате к хелатообра-зующему агенту. Первый из них - это хорошо известный метод непрерывных вариаций [386], основанный на измерении интенсивности флуоресценции ряда растворов, в которых суммарная концентрация ( ион металла реагент) одинакова, а отношение концентраций иона металла к реагенту варьирует. Максимум флуоресценции наблюдается в той точке, где отношение [ ион металла ] / [ реагент ] в растворе равно такому же отношению в комплексе. По второму методу [387] измеряется флуоресценция серии растворов, причем все они содержат ион металла в одинаковой концентрации, а концентрация реагента варьирует. В точке, где отношение [ ион металла ] / [ реагент ] в растворе равно соответствующему отношению в хелате, наклон полученной кривой изменяется. По мере того как константа диссоциации хелата увеличивается, наклон вновь уменьшается. В третьем методе [388] строят две кривые флуоресценция - концентрация. В пер вом случае ион металла с постоянной концентрацией с реагирует с меньшими, меняющимися концентрациями реагента, а во втором - реагент с концентрацией с соединяется с меньшими, меняющимися концентрациями иона металла. Обе зависимости линейны, и отношение их наклонов равно молярному отношению иона металла к реагенту в хелате. [12]
 |
Схема спектрометра фирмы Balrdi / - элементные модули. 2 - плазма.| Элементный модуль. / - лампа о полым катодом. i - ФЭУ. S-линзы. 4-интерференционный светофильтр. S-подставка. [13] |
Кроме разработки специальных приборов для АФА предложено несколько схем превращения приборов для атомноаб-сорбционного анализа в приборы для флуоресцентных измерений. [14]
Дальнейшее выяснение строения эксиплексов и влияния на него полярных растворителей связано с проведением спектральных исследований поглощения, дающих дополнительную к флуоресцентным измерениям информацию, которая может иметь и самостоятельное значение. [15]
Страницы: 1 2 3