Cтраница 1
Активация дыхания акцепторами энергии наблюдается только в том случае, если перенос электронов по дыхательной цепи прочно сопряжен с фосфорилированием. При разрушении митохондрий, при добавлении детергентов или разобщителей степень активации дыхания добавленным АДФ уменьшается или исчезает, что связано с нарушением сопряжения. Количественная оценка этого явления позволяет получить информацию о степени сопряженности препарата митохондрий, выделенного из различных органов и тканей. [1]
Убеждаются в активации дыхания, которое регистрируют до исчерпания кислорода в пробе. Строят графическую зависимость скорости дыхания от концентрации ДНФ и выбирают насыщающую концентрацию разобщителя. [2]
Так как в процессе активного транспорта катионов происходят активация дыхания и закисление среды инкубации, для выполнения работы может быть использована как полярографическая, так и рН - метрическая техника. Из-за трудностей, которые могут возникнуть при изменении скорости дыхания в присутствии низких концентраций катионов, предпочтение следует отдать рН - метрической технике для регистрации кинетики транспортного процесса. [3]
Добавление Са2 прекращают, когда очередная порция Са2 приводит к развивающейся во времени спонтанной активации дыхания. [4]
Для проведения следующей части работы на полярографе подбирают максимальную концентрацию Са2, добавление которого к митохондриям в среде с сукцинатом вызывает обратимую активацию дыхания. Дальнейшие измерения проводят на регистрирующем рН - метре. Для полного торможения транспорта Са2 в митохондриях диапазон концентрации ДНФ должен быть значительно ( в 2 - 3 раза) расширен по сравнению с опытами по измерению сукцинатоксидазной активности. [5]
На основании проведенных измерений строят графическую зависимость скорости дыхания митохондрий в присутствии ДНФ и АДФ, скорости окислительного фосфорилирования и коэффициентов АДР / О и ДК от количества предварительно накопленного Са2 в матриксе митохондрий. Каждая из перечисленных модификаций предотвращает спонтанную активацию дыхания в нагруженных Са2 митохондриях. [6]
В результате этого происходит стимуляция гликолиза. Последний в свою очередь приводит к накоплению метаболитов и активации дыхания. При повреждении к этому присоединяется изменение митохондрий, ядер и других внутриклеточных структур. Продукты распада внутриклеточных структур являются активными стимуляторами митохондриальной аденозинтрифосфатазы и, таким образом, гликолитического процесса. [7]
Активация дыхания акцепторами энергии наблюдается только в том случае, если перенос электронов по дыхательной цепи прочно сопряжен с фосфорилированием. При разрушении митохондрий, при добавлении детергентов или разобщителей степень активации дыхания добавленным АДФ уменьшается или исчезает, что связано с нарушением сопряжения. Количественная оценка этого явления позволяет получить информацию о степени сопряженности препарата митохондрий, выделенного из различных органов и тканей. [8]
Одним из процессов, сопровождающихся переносом неорганического фосфата через мембрану митохондрий, является активный транспорт кальция. Значительные количества Са2 могут быть аккумулированы митохондриями за счет энергии дыхания только в присутствии проникающих через мембрану анионов. В этом случае активация дыхания при добавлении Са2 приводит к накоплению во внутримитохонд-риальном пространстве соответствующих проникающему аниону кальциевых солей. Таким образом, активный транспорт Са2 сопровождается переносом через мембрану аниона. В физиологических условиях роль такого аниона выполняет неорганический фосфат. [9]
Присутствие Са2 в окружающей среде не влияет на процесс окислительного фосфорилирования. В этом убеждает следующцй опыт. К митохондриям, инкубируемым в среде с сукцинатом, добавляют 10 - 7 М рутениевый красный. Из-за инактивации системы транспорта Са2 последующее добавление катиона не вызывает обратимой активации дыхания. [10]