Cтраница 4
Разность оптической плотности при этой длине волн для 6-дезоксигексоз незначительна. Влияние гексоз можно также исключить, если, прежде чем добавить L-цистеин, нагревать испытуемый раствор с серной кислотой в течение 10 мин вместо 3 мин, как предусмотрено методикой. Более длительное нагревание вызывает почти полное исчезновение поглощения гексоз, в то время как для 6-дезоксигексоз оно уменьшается только на 20 % по сравнению с максимальным, достигнутым в результате 3-минутного нагревания. Если гексозы присутствуют в большом избытке, нужно приготовить стандартный раствор одной из гексоз, нагревать его одновременно с испытуемым образцом и, проведя необходимые измерения, ввести соответствующую небольшую поправку на содержание гексозы. [46]
К 1 мл раствора, содержащего 5 - 50 у сахара, добавляют при охлаждении водой 4 мл концентрированной серной кислоты, не содержащей следов тяжелых металлов и восстанавливающих веществ. Тотчас же по добавлении кислоты смесь энергично перемешивают встряхиванием и оставляют на 1 час при комнатной температуре, изредка встряхивая, но так, чтобы избежать попадания пузырьков воздуха, мешающих спектрофотометр ичоским измерениям. К реакционной смеси добавляют при встряхивании 0 1 мл 3 % - ного раствора аналитически чистого моногидрата солянокислого L-цистеина. Спектрофотометрические измерения проводят через 15 - 20 мин. [47]
Одновременно проводят холостой опыт, где вместо раствора тетрозы используют воду. Горячую реакционную смесь немедленно охлаждают водопроводной водой. К приготовленной таким образом смеси раствора тетрозы и серной кислоты добавляют 0 1 мл 3 % - ного раствора моногидрата солянокислого L-цистеина. Смесь оставляют на ночь при комнатной температуре, по окончании выдержки добавляют 1 2 мл воды. Первоначальная желтая окраска раствора изменяется до зеленовато-желтой с максимумом поглощения при 458 ммк максимум достигается приблизительно через 10 час и остается постоянным в течение длительного времени. Отсчеты сравнивают с пробой холостого опыта, которая имеет слабую фиолетовую окраску. [48]
Рассмотренный выше синтез природного аллиина подтвердил приписанные ему ранее строение и конфигурацию. Однако эта аминокислота труднодоступна. Сначала был синтезирован S-аллил - О, L-цистеин и из него нагреванием с муравьиной кислотой в уксусном ангидриде получено N-формильное производное. Затем это производное делилось на оптические антиподы дробной кристаллизацией его бруциновой соли из бутилового спирта. [49]
Приготовление: смешивают пептон, мясной экстракт, ацетат и дрожжевой экстракт с 800 мл воды. В оставшихся 200 мл дистиллированной воды готовят крахмальный раствор следующим образом: замешивают крахмал в небольшом количестве холодной воды до консистенции пасты. Подогревают оставшуюся воду до точки кипения и вливают в пасту. Затем добавляют этот раствор крахмала в первую смесь и подогревают до кипения, доводя смесь до растворения. Наконец добавляют глюкозу и L-цистеин гидрохлорид и растворяют их. Устанавливают рН 7 1 - 7 2 с помощью гидроксида натрия. [50]