Cтраница 4
Поскольку аминокислоты связаны своей карбоксильной группой с транспортной РНК, построение полипептидной цепи протекает, начиная с N-конца. [46]
Для ферментативного определения N-концевых групп иногда применяют и аминопептидазы - ферменты, которые последовательно отщепляют аминокислоты с N-конца полипептидной цепи. Наиболее хорошо изученным и часто применяемым ферментом является лейцинаминопептидаза, выделяемая из почек свиньи. Этот энзим был использован для изучения N-концевой последовательности инсулина и рибонуклеазы. В опытах на синтетических пептидах и амидах аминокислот было показано, что весьма медленно отщепляются те N-концевые аминокислоты, рядом с которыми стоят лизин, аргинин И ароматические аминокислоты. Эта относительно узкая специфичность действия энзима затрудняет его применение; специфичность действия других аминопеп-тидаз изучена недостаточно. [47]
Отличается этот гормон от двух предыдущих, помимо циклической структуры, тем, что не содержит на N-конце пироглутаминовой кислоты: дисульфидная связь образуется между двумя остатками цистеина в 3 - м и 14 - м положениях. Следует отметить, что синтетический линейный аналог соматостатина также наделен аналогичной биологической активностью, что свидетельствует о несущественности дисульфидного мостика природного гормона. Помимо гипоталамуса, соматостатин продуцируется нейронами центральной и периферической нервных систем, а также синтезируется в S-клетках панкреатических островков ( островков Лангерганса) в поджелудочной железе и клетках кишечника. Он оказывает широкий спектр биологического действия; в частности, показано ингибирующее действие на синтез гормона роста в аденогипофизе, а также прямое тормозящее действие его на биосинтез инсулина и глюкагона в 3 - и а-клетках островков Лангерганса. [48]
Последняя выполняет важную клеточную функцию, она входит в состав рибонуклеопротеидных частиц, узнающих сигнальный пептид на N-конце новообразованного сек-ретируемого белка. Частицы участвуют в биосинтезе секретиру-емых белков, обеспечивая прикрепление рибосомы к мембранам эндоплазматической сети. Анализ нуклеотидной последовательности коротких повторов показывает, что матрицей для их образования послужили 7S РНК, тРНК и, наконец, UPHK, подвергшиеся процессингу и ошибочному полиаденилированию. Возможно, образование шпильки на З - конце молекул обеспечило затравку ( праймер) для обратной транскриптазы. [49]
Классический пептидный синтез в растворе, подразделяемый на ступенчатый синтез линейных пептидов, осуществляемый последовательным присоединением аминокислот от С-конца к N-концу цепи, и на блочный синтез линейных пептидов, когда построение цепи ведется из предварительно синтезированных фрагментов. [50]
Фундаментальный факт в наших знаниях по рибосомному синтезу белка состоит в том, что полипептидная цепь строится путем последовательного роста от N-конца к С-концу. В течение элонгации растущий С-конец остается всегда ковалентно фиксированным в пептидилтрансферазном центре на рибосоме, а N-конец свободен. Естественно допустить, что по мере синтеза белка на рибосоме должно происходить также его сворачивание, и что сворачивание должно начинаться с его N-концевой части. [51]
Высокая степень гидрофобности центрального участка реакционного центра свидетельствует о том, что пять а-спиральных сегментов субъединиц Л и С, а также N-конце во и фрагмент субъединицы Т расположены а толще мембраны. Все эти I I участков и составляют мембранную часть комплекса. Спиральные участки расположены в пространстве практически перпендикулярно плоскости мембраны. Субъединица Т и цитохром с связываются с внутренней и наружной поверхностями мембраны соответственно, причем цитохром с не содержит участков, пронизывающих мембрану. По два мембранных фрагмента от каждой из субъединиц Л и С участвуют в связывании негемового железа. Более того, четыре лиганда, необходимые для связывания атома железа, обеспечиваются этими же четырьмя спиралями. Лиганды для ионов магния молекул бактериохлоро-филла - остатки гистидина - расположены у самого входа ct - спи-ральных сегментов в мембрану. Что же касается негемового железа, то в его связывании участвуют четыре остатка гистидина субъединиц Л и С и глутаминовая кислота субъединицы С. [52]