Cтраница 1
Реактив Паули приготавливают смешением 20 мл 10 % - ного водного раствора сульфанилата натрия с 10 мл 8 % - ного раствора азотистокислого натрия и 4 мл концентрированной соляной кислоты. Этой смеси перед употреблением дают постоять 1 мин. Примерно 0 2 г пряжи тщательно смачивают в 30 мл 9 % - ного раствора соды. Шерсть выдерживают в реактиве 10 мин, а затем исследуют. Предполагают [17], что чувствительность метода и стабильность реактива можно увеличить, добавив в раствор небольшое количество бромистого лития. В общем эта реакция оказывается более удовлетворительной для количественного колориметрического анализа больших образцов, чем для микроанализа поврежденной шерсти. [1]
Хроматограмму вынимают, вышивают, обрабатывают раствором 10 % - ной спиртовой щелочи затем реактивом Паули. Арбутин имеет самое высокое значе - 1е К. [2]
При обработке хроматограмм раствором нитрата серебра и щелочью фенольные гликозиды обнаруживаются в виде коричневых пятен с различным оттенком. При обработке хроматограмм реактивом Паули фенольные гликозиды в зависимости от строения проявляются в виде желтых, оранжевых или красных пятен. [3]
Для хроматографического разделения на бумаге полиамидных гидролизатов на аминокомпоненты ( e - аминокапроновая кислота и гексаметилендиамин) в качестве растворителя оказывается пригодной смесь из 75 частей вторичного бутанола, 15 частей муравьиной кислоты ( 88 % - ной) и 10 частей воды. Аминокомпоненты определяются по флюоресценции или путем обработки реактивом Зангера, реактивом Паули или раствором нингидрина. Амино-капроновая кислота перемещается в 4 раза дальше, чем гексаметилендиамин. [4]
Из ряда методов бумажной хроматографии, используемых для определения в сточных водах и технических продуктах концентрации одноатомных фенолов, наилучшим в настоящее время нам представляется метод Гудечека. Преимущество его заключается в том, что потери от испарения ликвидируются при проявлении хроматограммы между двумя стеклянными пластинками. Проявление производится реактивом Паули. [5]
Из оставшейся части спиртового извлечения берут 0, 01 мл и наносят на пластинку Силуфол или силикагеля ( закрепленный слой) ц хроматографи-руют в системе - гексан - бензол - метиловый спирт ( 5: 4: 1) до тех пор, пока линия фронта не достигнет расстояния 10 см от линии старта. После этого хроматограаду высушивают на воздухе в течение 10 мин, опрыскивают 10 % - пым КОН в метаноле и высушивают в сушильном шкафу при I - 110 - 120 СС в течение 2 - 3 мин. Затем опрыскивают свежеприготовленным реактивом Паули по Кутачеку. [6]
Опрыскивание раствором диазониеиой соли особенно пригодно для проявления фенолов и производных имидазола. В то время как для сочетания соли дназония с ароматическим алшном оптимальные значения рН составляют 3 5 - 7 0, фенолы и имидазолы образуют азокрасители скорее в щелочной среде, которую чаще всего создают с помощью раствора соды или буферных растворов. К наиболее часто применяемым для диазотиро-вания аминам относятся / г-питроапилин, сульфаниловая кислота и сульфаниламид ( реактив Паули), / г-бромапилил и бепзидин. [7]
Для хроматографии флавоноидов окись алюминия непригодна, так как с многими флавоноидами она дает нерастворимые окрашенные комплексы. Полиамидный слой накатывают в сухом виде или наносят в форме кашицы в смеси со связующим ( например, полиак-риакрилонитрилом) и без него. Открытие флавоноидов осуществляется легко, так как они в большинстве случаев окрашены или флуоресцируют. Часто пользуются теми же проявителями, что и в хроматографии на бумаге, например парами аммиака, аммиачным раствором окиси серебра, хлорным железом, хлористым алюминием, реактивом Паули, диазотиро-ванным бензидином. [8]
Универсальной реакцией имидазолов является реакция азосочетания с диазотированными аминами, при которой на бумаге образуются ярко окрашенные пятна. Чаще всего используют сульфаниламид, сульфаниловую кислоту ( реактивы Паули; Д51), гс-хлоранилини w - нитроанилин ( см. также стр. С сульфаниламидом гистидин и гистамин дают продукты, окрашенные в ярко-красный цвет, имидазолпропионовая кислота дает несколько менее ярко окрашенные продукты. Для проявления метилгистидина, гистидина и гистамина можно также использовать нингидрип. Однако, по данным Копне и Вуда, 1 метил-2 - меркапто - и 1-метил - 2-тиоциапоимидазол дают с реактивами Паули окрашенные продукты. Для проявления веществ с заместителями в положении 1 Каугилл использовал 1 % - ный раствор йода в этаноле. В этом случае большинство веществ дает пятна с неустойчивой окраской, но все вещества дают пятна с устойчивой флуоресценцией. Однако с этим реактивом реагируют и остальные имидазолы, у которых положение 1 свободно. В этом случае для проявления и идентификации также используют облучение ультрафиолетовым светом. [9]
Для нанесения носителя на пластинки могут быть использованы описанные выше приборы, позволяющие получать слой разной толщины. Если суспензию носителя раскатывать стеклянной палочкой, на обоих концах которой наклеено несколько витков изоляционной ленты, также образуется достаточно ровный слой. Свежеприготовленные пластинки в течение 20 - 25 мин подсушивают на воздухе. Их можно-довольно долго хранить во влажной камере, если исключена возможность бактериального роста. При нисходящей тонкослойной гель-фильтрации пластинку располагают в камере под углом 10 - 15, Как правило, гель-фильтрацию проводят в водных растворах, поэтому хроматографическая камера может быть изготовлена из пластмассы. Она состоит из кюветы для буферного раствора, рамки, поддерживающей пластинку под соответствующим утлом, и крышки. Подача буферного раствора на пластинку осуществляется с помощью фитиля из фильтровальной бумаги. В качестве маркеров удобно использовать окрашенные высокомолекулярные вещества ( например, меченные флуоресцеином ферритин или v-глобулин), которые не задерживаются частицами геля. Гель-фильтрацию проводят до-тех пор, пока маркер не пройдет по крайней мере 10 см от линии старта. После этого пластинку извлекают из рамки и покрывают слой носителя листом фильтровальной бумаги ( например, Шляй-хер - Шуль 2043 или ватман 3 ММ), вырезанным по размеру пластинки. Некоторые исследователи рекомендуют применять в этом случае лист сухой фильтровальной бумаги. В нашей лаборатории используется смоченная и тщательно отжатая фильтровальная бумага, так как с ее помощью легче прикрыть слой носителя без образования под бумагой пузырьков воздуха. После этого бумагу снимают ( иногда вместе с частичками геля), высушивают при температуре около 120 С и окрашивают красителями, выявляющими белок, или реактивом Паули. Во время отмывания несвязавшегося красителя частички геля отделяются от бумаги, и после высушивания она может быть использована для документации. [10]