Электрофоретическая камера

Cтраница 1

Электрофоретическая камера выполнена из винипласта и разделена на две ячейки - катодную и анодную. Посередине камеры - стойка со стеклянными перекладинами для подвешивания электрофорограммы. [1]

Простейшая электрофоретическая камера представляет собой плос-кий санал глубиной 0 7 - 1 и шириной 10 - 15 мм, образованный двумя предметными стеклами, или трубку. Измерение электрофоретической скорости частиц осложняется тем, что по высоте камеры она распределяется неравномерно. По краям камеры сказывается влияние явления электроосмоса, по смыслу противоположного электрофорезу. В современных зарубежных приборах это устраняется особым устройством. В простейших дзета-метрах нужно искать так называемый стационарный уровень, где сила электроосмоса практически не сказывается. [2]

В электрофоретической камере находится съемная пластмассовая рамка 5, на которую укладываются полоски фильтровальной бумаги. [3]

В электрофоретических камерах типа Грассмана-Ханнига можно использовать стеклянные пластинки размером 16 х 4 см. Приготовление агарового слоя на этих пластинках производится так же, как описано выше. [4]

Нами применялась электрофоретическая камера, описанная Дуррумом [1], в которой в качестве электродов использовали платиновую проволоку вместо платиновой фольги. [5]

Электродные резервуары электрофоретической камеры заполняют буфером ( пиридин-уксусная кислота - EDTA - 7 М мочевина для ацетилцеллюлозы или 7 % - ная муравьиная кислота для DEAE-бумаги), а остальную часть камеры - варсолом. Для отвода тепла с поверхности аце - тилцеллюлозы или DEAE - бумаги в процессе электрофореза через охлаждающие змеевики пропускают воду. Отрезают полоску ацетилцеллюлозы такой длины, чтобы она лежала на рамке, а концы ее погружают в буфер в каждом электродном резервуаре. Для некоторых камер эта длина составляет 60 или 90 см. Затем на одном конце полоски ацетил-целлюлозы отмечают положение пробы. Это легко проделать восковым карандашом на расстоянии 6 см от конца; такое расстояние достаточно, чтобы пятно образца было выше уровня буфера в резервуаре, когда рамка будет в рабочем положении. Полоску ацетилцеллюлозы на несколько минут погружают в буфер, затем окунают в варсол и переносят на рамку. Затем рамку вынимают из камеры, ставят на бок и с того места, где должен находиться образец, фильтровальной бумагой удаляют варсол. На предварительно отмеченном уровне в центре полоски микропипеткой или простым капилляром с оттянутым концом наносят образец, а по обе стороны от него - по одному пятну индикаторного красителя. [6]

Если заполняющий отсеки электрофоретической камеры буферный раствор находится на разных уровнях, то из отсека с более высоким уровнем он перетекает по бумажным полоскам в отсек с более низким уровнем. Этот поток буферного раствора в зависимости от направления может либо тормозить, либо ускорять миграцию белков. [7]

Приготовленную пластинку с агаром закрепляют в электрофоретической камере. Свисающие с ее концов покрытые в верхней части агаром полоски фильтровальной бумаги погружают в буферный раствор. [8]

Полоску фильтровальной бумаги кладут на рамку в электрофоретической камере таким образом, чтобы оба ее конца, выходящие за рамку, были погружены в буферный раствор ( фиг. После укладывания полосок камеру закрывают стеклянной крышкой и аппарат включают в электросеть. Электрофорез продолжается от 12 до 16ч при 110 В и силе тока около 1 мА на полоску. [9]

Следует проверить состояние кабелей, соединителей и водонепроницаемость электрофоретической камеры и электродных сосудов. Прежде чем подсоединить источник питания, следует исключить возможность попадания влаги в аппарат. [10]

В результате испарения буферного раствора на внутренней поверхности стеклянной крышки, закрывающей электрофоретическую камеру, происходит конденсация воды и образование капель. Опасности попадания капель воды на электрофореграмму во время опыта или при удалении крышки можно легко избежать, если внутреннюю поверхность крышки покрыть листом фильтровальной бумаги. [11]

Чтобы избежать перетекания, следует тщательно выравнивать уровни буферного раствора во всех отсеках электрофоретической камеры до внесения в нее бумажных полосок. Обычно отсеки приборов для электрофореза снабжены отводными кранами, которые соединяются резиновым шлангом. После заполнения прибора буферным раствором отводные краны открывают ( или, если кранов нет, снимают зажим с соединяющего отсеки резинового шланга), и происходит выравнивание уровней. [12]

Чтобы полностью устранить влияние этого процесса на разделение белков, следует уложить смоченные буферным раствором полоски бумаги на рамку, поместить их в электрофоретическую камеру и закрыть крышку. [13]

Схема прибора для электрофореза на ацетатцеллюлозных мембранах. [14]

САМ); 2 - поддерживающий стержень для ввода тока; 3 - держатель полоски из САМ; 4 - бумажный мостик-фитиль для прохождения тока во внешнюю ячейку; 5 - регулируемая пластиковая подложка; 6 - внутренние электродные ячейки; 7 - ватные мостики-фитили ячеек; 8 - полость для водяного затвора электрофоретической камеры; 9 - крышка камеры, вставляемая в полость водяного затвора. [15]

Страницы: 1 2