Cтраница 3
Следует отметить, что когда вещество содержит эсте-разу, прибавление толуола излишне, ибо выделяющийся уже через несколько минут гваякол имеет сильное антисептическое действие. Одновременно ставится контрольная проба с кипяченой эмульсией. Смесь держится еще несколько секунд при кипении, затем быстро охлаждается, доводится водой до черты и, если это необходимо, фильтруется через сухой фильтр. Получающееся окрашивание сравнивается со шкалой, приготовленной из чистого раствора гваякола и равных количеств пероксидазы и перекиси водорода. Для приготовления шкалы в ряд колориметрических трубок наливается по 20 см3 растворов, содержащих возрастающие количества гваякола ( 0.1 - 10 мг), по 1 капле раствора пероксидазы и по 2 капли раствора перекиси водорода. Метод легко выполняется и дает сравнимые результаты. Его чувствительность превосходит чувствительность обычных методов в сотни раз. [31]
Присутствие двух ферментов, пероксидазы и каталазы, характерно для мельчайших частей живого вещества. Пероксидаза ускоряет окислительное действие перекиси водорода и органических перекисей, каталаза совершенно прекращает это окислительное действие, разлагая перекись водорода на молекулярный инертный кислород и воду. О физиологическом значении этих ферментов можно еще спорить, но их биологическая повсеместная распространенность не оспаривается и неоспорима. Однако существует одно исключение. В настоящее время мы говорим, что дрожжи содержат каталазу, но не содержат пероксидазы. В течение моих исследований над окислительными ферментами я неоднократно имел случай проверять и подтвердить правильность наблюдения Шенбей-на. Мне удалось2 также привести доказательство и a contrario, установив, что незначительные количества пероксидазы, прибавленные заранее к дрожжам, легко могут быть обнаружены посредством обычных реактивов. Если растереть 1 г зимазы ( ацетоновые дрожжи) с 20 см3 воды и прибавить раствор гваякола и перекиси водорода, то смесь остается бесцветной. Если же прибавить к препарату дрожжей последовательно раствор гваякола, 1 каплю активного раствора пероксидазы и перекись водорода, то смесь немедленно окрашивается в красно-коричневый цвет. Окрашивание исчезает более или менее быстро, но вновь появляется при прибавлении перекиси водорода. С пирогаллолом и гидрохиноном получается аналогичный результат. Таким образом, если дрожжи не дают реакции на пер-оксидазу, то это потому, что в них нет этого фермента, а не потому, что реакция пероксидазы перекрывается задерживающими веществами. [32]
Полученная пероксидаза-сырец ( 52 г) растиралась с 600 см3 воды, причем только незначительная часть ее переходила в раствор. По истечении 24 часов образовавшийся осадок отфильтровывался, промывался небольшим количеством воды; к фильтрату ( 600 см3) прибавлялся уксуснокислый натрий в порошке до прекращения появления мути. Потреблено: 21 г сухого уксуснокислого натрия. Предварительные опыты показали, что для диализа нельзя применять ни пергаментную бумагу, ни гильзы фирмы Шлейхер, так как пероксидаза довольно быстро диализирует через такого рода мембраны. Лучшие результаты получены с настоящим пергаментом, хотя и он пропускает значительные количества пероксидазы. Для приготовления диализатора на широкое горло склянки, дно которой было вырезано, натягивался большой кусок пергамента; полученный таким образом пергаментный мешок наполовину наполнялся раствором пероксидазы и погружался на одну треть в дестиллированную воду. [33]
На основании всех этих фактов я считаю возможным утверждать, что дрожжи не содержат пероксидазы, которую можно было бы обнаружить обычными реактивами; этим они резко отличаются от других живых организмов. Единственным известным до сих пор каталитическим действием, которое оказывает пер-оксидаза, является ускорение окислительного действия перекиси водорода и органических перекисей. Эти перекиси образуются при действии свободного молекулярного кислорода на ненасыщенные, легкоокисляемые вещества. Другими словами, действие пероксидазы находится в тесной связи с кислородным дыханием клетки. Если жизнь клетки происходит в отсутствии кислорода, то она не нуждается в пероксидазе и поэтому не производит ее. Поэтому отсутствие пероксидазы в строго анаэробных дрожжах легко понятно. Однако не исключена возможность, что те сорта дрожжей, которые частично используют свободный кислород, содержат большее или меньшее количество пероксидазы. Для выяснения этого вопроса существует только один путь: сравнительные опыты с чистыми культурами дрожжей верхнего и нижнего брожения. [34]