Лигазы
Cтраница 2
Лигазы катализируют соединения двух молекул, сопряженное с разрывом пирофосфатной связи АТФ или другого макроэргическо-го соединения. Систематическое название этих ферментов составляют по форме А: В лигазы, где через А и В обозначают исходные вещества. В этот класс включены ферменты, катализирующие реакции образования связей С-О, С-S, С-N, С-С. Например, образование С-N - связи при синтезе глутамина катализирует фермент 1-глута-мат: аммиаклигаза, тривиальное название - глутаминсинтетаза: АТФ L-глутамат NH4 - АДФ ортофосфат L-глутамин. [16]
Все лигазы катализируют реакции, идущие с участием трех субстратов и дающие три продукта. Во всех изученных случаях процесс идет через две или три стадии, причем первые не требуют участия всех трех субстратов - и поэтому могут изучаться и осуществляться в упрощенной системе. Во всех случаях синтез продукта и гидролиз АТФ проходят сопряженно через некоторый общий промежуточный продукт. [17]
СИНТЕТАЗЫ ( лигазы) - класс ферментов, катализирующих соединение двух молекул, сопряженное с разрывом макроэргич. [18]
Рестриктазы вырезают участки ДНК, убирая нежелательные вставки, а лигазы обеспечивают сшивку фрагментов нуклеиновой кислоты. ДНК-полимеразы ответственны за репликацию дочерней ДНК по материнской. ДНК-зкависимые-РНК-полимеразы отвечают за транскрипцию, осуществляют построение РНК на матрице ДНК. [19]
Соединение соседних блоков ДНК водородными связями должно предшествовать ковалентному связыванию под действием лигазы. Эксперимент показал, что липкие концы должны содержать не менее 3 - 4 нуклеотидных звеньев. [20]
Соединение соседних блоков ДНК водородными связями должно предшествовать ковалентному связыванию под действием лигазы. Эксперимент показал, что липкие концы должны содержать не менее 3 - 4 нуклеотидных звеньев. [21]
 |
Упрощенная генетическая карта фага л ( зачерченный участок соответствуют генам, несущественным для размножения фага. [22] |
Таким образом, выделив репликативную форму ДНК и расщепив ее в области несущественного участка, можно с помощью лигазы вставить в место разрыва чужеродную ДНК. [23]
В принятой международной классификации все ферменты разделены на 6 главных классов: оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы и лигазы. Каждый из классов разделяется на подклассы, которые, в свою очередь, делятся на подподклассы, и уже в последних дается список отдельных ферментов, входящих в данный подкласс. [24]
В принятой международной классификации все ферменты разделены на шесть главных классов: оксидоредуктазы, трансфера-зы, гидролазы, лиазы, изомеразы и лигазы; последние иначе называются синтетазами. Каждый из классов разделяется на подклассы, которые, в свою очередь, делятся на подподклассы и уже в последних дается список отдельных ферментов, входящих в данный подподкласс. В соответствии с этой системой каждый фермент имеет свой шифр, состоящий из четырех цифр, определяющих класс, подкласс, подподкласс и личный номер каждого фермента в своей группе. Так, например, целлюлаза относится к классу гидролаз ( 3), подклассу гидролаз, действующих на гли-козильные соединения (3.2), подподклассу гидролаз гликозидов (3.2.1), а ее номер в этом подподклассе - четвертый. [25]
С помощью ферментативных методов можно эффективно осуществить два типа реакций конденсации, присоединение мономерного остатка к 5 -концу олигонуклеотида и соединение по типу голова-к-хвосту двух цепей с помощью фермента лигазы. Действие ДНК-зависимой РНК-полимеразы описано в разд. [26]
Все ферменты разделяются на шесть главных классов: 1) оксидоредуктазы, или окислительно-восстановительные ферменты; 2) трансферазы, катализирующие перенос различных групп с одной молекулы на другую; 3) гидролазы, катализирующие гидролитические реакции; 4) лиазы, отщепляющие от субстратов ту или иную группу негидролитическим путем с образованием двойной связи или, наоборот, присоединяющие группы к двойным связям; 5) изомеразы, катализирующие изомеризацию органических соединений; 6) лигазы или синтетазы, катализирующие синтетические реакции, сопровождающиеся отщеплением остатков фосфорной кислоты от АТФ или аналогичных трифосфатов. [27]
Лигазы, которые образуют С-N - связи. Наиболее важными из них являются кислотно-аминокислотные лигазы ( пептид - синтетазы), катализирующие образование пептидных связей. [28]
Понятно, что это чудо химической и инженерной мысли решает все проблемы, связанные с искусственным синтезом гена. Из лоскутков по 20 нуклеотидов можно при помощи лигазы сшить ген любой длины. Это решает также проблему получения в больших количествах коротких кусков ДНК для их кристаллизации. Впрочем, такие машины появились в самом начале 80 - х годов, но в конце 70 - х в некоторых лабораториях, занимавшихся синтезом генов, уже умели быстро синтезировать лоскутки ДНК, правда, вручную. [29]
Недавно было обнаружено, что короткая цепь РНК, образующая гибрид РНК-ДНК, может служить затравкой для ДНК-полимеразы in vitro. Эти данные в сочетании с обнаружением фрагментов Оказаки и лигазы дают основание думать, что в репликационной вилке происходят следующие события: двухцепочеч. ДНК раскрывается в ограниченном участке, вероятно, при участии расплетающих белков разд. В специальной затравочной области синтезируется короткий фрагмент РНК-затравки, образующей пары оснований с ДНК. [30]
Страницы: 1 2 3 4