Флуоресцентное измерение

Cтраница 2

Пренебрежение основными закономерностями последнего приводило в недавнем прошлом к использованию неудобной геометрии и к неправильной интерпретации получаемых результатов и было одной из причин того, что методика флуоресцентных измерений была встречена некоторыми исследователями с недоверием. [16]

При практическом выполнении количественных определений характеристика аналитических реакций должна давать ответ на вопрос, в каких пределах содержаний искомого вещества следует применять ту или иную реакцию и каковы должны быть условия ее использования для получения наилучших результатов. При флуоресцентных измерениях положение осложняется тем, что при прочих равных условиях, яркость флуоресценции одних и тех же растворов ( а следовательно, и ступени ее различения) зависит от мощности возбуждающего потока, и при использовании разных приборов она будет различна. Для того чтобы можно было сравнивать флуоресценцию веществ, измеренную в неодинаковых условиях, была предложено выражать ее через хининовый или флуоресцеи. Для этого свечение растворов представляют в виде концентрации таких растворов хинина или флуорес-цеина, которые в примененных условиях измерения имеют такую же яркость, как и исследуемое вещество. [17]

Так, Шнепп [98] в 1963 г. утверждал, что спектры флуоресценции нафталина и антрацена, изученные в последние 10 лет, связаны с примесями и не отражают свойств чистого кристалла. Следовательно, все флуоресцентные измерения необходимо тщательно проверять, прежде чем принять их как окончательные. Аналогичная переоценка применима к фосфоресценции кристаллов ароматических углеводородов. [18]

Сканирующее устройство типа Camag-Turner аля хроматограмм в тонком слое. [19]

В качестве источника света используются 4-ваттные ртутные лампы низкого давления; некоторые из них, с флуоресцентным покрытием, позволяют выделять первичный свет в диапазоне длин волн от 254 до 560 нм. Обычно для всех флуоресцентных измерений используют только эмиссию, при 366 нм, а для метода гашения - линию при 254 нм. [20]

В табл. 3.13 даются некоторые определения времени жизни первого возбужденного синглетного состояния донора. Эти величины были получены путем скоростных флуоресцентных измерений с временем разрешения порядка наносекунд. [21]

Это желательно не только для флуориметрии. Насыщение паровой фазы - важный фактор во всех поверхностных методах сканирования in situ, но флуоресцентные измерения наиболее пригодны для получения линейных зависимостей. [22]

Флуоресцентные методы анализа суспензий микроорганизмов, по-видимому, наиболее перспективны, так как дают с помощью сравнительно простой аппаратуры большую информацию об объекте исследования, в частности, позволяют: а) определять концентрацию микроорганизмов в суспензии; б) дифференцировать разнородные, по Граму, живые и мертвые микроорганизмы; в) анализировать распределение частиц по размерам и, наконец, г) определять видовой состав суспендированных микроорганизмов. Столь большие возможности флуоресцентных методов анализа микробных суспензий, высокая чувствительность флуоресцентного анализа вообще и возможность проводить флуоресцентные измерения не только в объеме пробы, но и способом микроанализа, заставляют нас подробно рассмотреть эту группу методов. [23]

Работы [250, 319, 452] посвящены исследованию воспроизводимости прямых спектрофотометрических и флуориметрических методов анализа и достижимой точности в серийных определениях. Относительное стандартное отклонение равняется 1 - 5 3 % ( при сканировании одной хроматограммы) и 4 - 6 % ( различных хроматограмм) для отражательной спектроскопии; 4 - 6 ( для одной хроматограммы) и 8 6 - 12 % ( для различных хроматограмм) - для флуоресцентных измерений. [24]

Если измеряется флуоресценция твердого тела, то существует линейная зависимость между флуоресценцией и концентрацией до определенной величины при условии, что концентрация не слишком высока. В флуоресцентных измерениях на тонкослойных пластинках это не имеет места. Калибровочные кривые более или менее изогнуты. В этом проявляется влияние изменения концентрации образца по направлению к поверхности слоя, причем это изменение определяется испарением растворителя во время хроматографического процесса. [25]

Беннет [35] использовал лампу Мальмберга в качестве стробоскопического источника и фиксировал флуоресценцию с помощью фотоумножителя, который нормально был заперт, но отпирался через определенный промежуток времени после вспышки специально подаваемыми импульсами высокого напряжения. По-видимому, системы Броди и Беннета вполне пригодны для точных флуоресцентных измерений времени жизни. Система Беннета позволяет получать данные в более удобной форме. Беннет нашел, что для времен жизни флуоресценции, больших чем 4 - 10 - 9 сек, измеряемая константа скорости спадания сигнала почти точно соответствует истинному времени жизни флуоресценции, но для более коротких времен необходимо вводить поправку: непосредственно измеряемые времена жизни больше, чем истинные, на 7 % при времени жизни 3 - 10 - 9 сек и на 30 % для 2 - 10 - 9 сек. Из-за конечного времени жизни возбужденного состояния поглощающей молекулы флуоресценция возбужденной молекулы несколько запаздывает, и поэтому возникает сдвиг фаз между модулированной флуоресценцией и модулированным возбуждающим светом. [26]

Из рис. 7 - 56 видно, что чувствительность фотоэлементов сильно зависит от длины волны. В этом смысле они являются полной противоположностью термоэлементам, которые имеют одинаковую чувствительность. Зависимость чувствительности от длины волны является основной трудностью при флуоресцентных измерениях; здесь необходимо измерять энергию в широком интервале частот ( см. разд. Естественно, эти трудности не возникают в том случае, когда производится измерение относительной интенсивности истинно монохроматического света. Если имеется свет другой частоты, то при измерении доли поглощенного света могут возникнуть серьезные ошибки ( см. замечание 6 на стр. [27]

На тех же приборах трудно определить объем лучеиспускающего раствора ( может быть получен свет, сходящийся в одной точке); это может оказаться необходимым для выражения чувствительности в менее точной, но практически более удобной форме, а именно как граничная концентрация для данных приборов. По крайней мере для низких интенсивностей флуоресценции чувствительность точно определяется флуоресцентным измерением. [28]

Комплектные спектрофлуориметры с двумя монохромато-рами, из которых один служит для возбуждения флуоресценции лучистым потоком переменной длины волны, а второй - для спектрального разложения излучения флуоресценции, выпускают некоторые фирмы США. Таковы Аминко-Боумен спект-рофотофлуорометр ( Америкен Инструменте Компани), диф-фракционный прибор с ксеноновой лампой, снабженный приставками для термостатирования испытуемых растворов и твердых веществ, для работы в инфракрасной области и для измерения фосфоресценции в отраженном свете при низких температурах ( до - 114 С); флуоресцентный спектрофотометр Флуо-риспек типа СФ-1 ( Байрд Этомик Инкорпорейшн) с двойными диффракционными монохроматорами; спектрофлуорометр ( Фэр-ренд Оптикел Компани) с ксеноновым осветителем и регистрирующей приставкой, позволяющий производить измерения в объемах жидкости от 0 2 до 10 мл. К обычным спектрофотометрам большинство зарубежных фирм ( в частности Бекман, Перкин-Эльмер, США; Карл Цейсе, ФРГ) выпускает специальные приставки для проведения флуоресцентных измерений. [29]

Полосы поглощения некоторых молекулярных загрязнителей, в частности SO2, O3, NO, NO2) NH3, NCOH ( формальдегид), С6Н6 ( бензол), лежат в ультрафиолетовой области спектра. Молекулы, поглотившие квант света, оказываются в электронном возбужденном состоянии и могут участвовать как в различных безызлуча-тельных, так и в излучательных процессах. Поэтому представляется возможным использовать для контроля атмосферных загрязнителей и флуоресценцию. Весомым преимуществом флуоресцентных измерений является ( как и в оптико-акустическом методе) отсутствие большого фона, не несущего информации о поглощающих молекулах. [30]

Страницы: 1 2 3