Заряд - белок
Cтраница 2
Изменяя реакцию среды, можно менять заряд белка; при опред ленном рН заряд белка будет равен нулю. Такое состояние белка ( р венство кислотной и основной диссоциаций) называется изоэлектрич ской точкой, которая является константой для белка. [16]
Кроме самого белка, в растворе всегда имеются ионы электролитов: буферная система, используемая для поддержания рН среды, противоионы, нейтрализующие заряд белка; часто добавляют нейтральные соли. Ниже будет показано, что точный электро-форетический анализ белковой смеси возможен только в том случае, если концентрация электролита в растворе значительно превышает эквивалентную концентрацию белка. [17]
Кроме самого белка, в растворе всегда имеются ионы электролитов: буферная система, используемая для поддержания рН среды, противоионы, нейтрализующие заряд белка; часто добавляют нейтральные соли. Ниже будет показано что точныйэлектро-форетический анализ белковой смеси возможен только в том случае, если концентрация электролита в растворе значительно превышает эквивалентную концентрацию белка. [18]
С другой стороны, было видно, что отрицательный заряд некоторых фракций белков восприимчивых сортов, который появляется в результате их диссоциации в щелочном буфере, меньше по величине, чем заряд белков устойчивых сортов. В результате этого скорость передвижения некоторых белковых фракций в соке восприимчивых сортов оказывается меньше скорости электроосмоса, и эти фракции передвигаются к катоду, хотя на самом деле обладают обычной анодной подвижностью. [19]
Их изоэлектричехжий пункт будет сдвинут в щелочную сторону, ибо для подавления диссоциации аминяых групп, число которых является преобладающим, необходимо добавить известное количество щелочи, чтобы уравновесить плюс и минус заряды белка. [20]
 |
Зависимость между электрофоретической подвижностью яичного альбумина и количеством сильной кислоты или щелочи, которая пошла на его титрование. Ионная сила 0 01. рН изменялся от 3 1 до 11 7. [21] |
Из табл. 2 видно, что данные, полученные по мембранному потенциалу, очень хорошо совпадают с электрофоретическими, и совпадение улучшается с уменьшением ионной силы. Заряд белка, найденный титрованием, заметно отличается от полученного электрофорезом, несмотря на то что кривая титрования была сдвинута так, чтобы ее пересечение с осью абсцисс совпало с изоэлектрической точкой: заряд, найденный по подвижности, получается меньше, что несомненно следует приписать связыванию противоионов. [22]
 |
Расположение зон на различных стадиях зонного электрофореза. [23] |
В процессе электрофореза рН также не меняется. Поскольку общие величины зарядов белков и, следовательно, их электрофоретические подвижности при заданном значении рН значительно различаются, белки лучше всего разделять именно в таких системах. [24]
Заряд белков обусловлен в первую очередь остатками аспартата и глутамата, имеющими при нейтральном и щелочных значениях рН отрицательный заряд, и остатками лизина и аргинина, имеющими при слабоосновных и тем более при нейтральном и кислых рН положительный заряд. По мере повышения рН заряд белков проходит от положительных к отрицательным значениям и в изоэлектри-ческой точке ( см. § 3.1) оказывается равным нулю. Вблизи этой области белок оказывается лишенным ионной атмосферы и его молекулы могут беспрепятственно сближаться до радиуса действия ван-дер-ваальсова притяжения. В ряде случаев это приводит к выпадению белка в осадок. Такой способ выделения белков из раствора называют изоэлектрическим осаждением. [25]
Очевидно, это происходит вследствие нейтрализации зарядов белков. [26]
Влияние, оказываемое белками и коллоидами на результаты измерений рН с помощью индикаторов, обусловлено амфотерностью белковых молекул или зарядом коллоидных частиц. Вероятно, связывание индикаторных красителей сильно зависит от заряда белка; оно является наименьшим вблизи изоэлектрической точки. [27]
 |
Колонка с ДЭАЭ ( диэтиламиноэтил целлюлозой для очистки аргиназы. [28] |
Белки, благодаря наличию в них способных к ионизации групп, могут связываться с ионообменником. Степень взаимодействия различных белков с ионообменником зависит от ряда факторов, в том числе от суммарного заряда белков. Если заряд белков различен. При пропускании соответствующих элюирующих растворов через колонку происходит: вымывание отдельных белковых фракций в соответствии со степенью их взаимодействия с ионообменником. [29]
Чтобы описать эффект Гиббса - Доннана, мы должны рассмотреть мембраны, проницаемые как для молекул растворителя, так и для содержащихся в буферах малых ионов. Именно такого типа мембраны являются структурным компонентом циркуляторных систем организма; в нормальных условиях они проницаемы для неорганических солей и непроницаемы для белков. Из экспериментальных данных, приведенных на рис. 3.7, видно, что эффект зависит от рН и, следовательно, должен быть связан с зарядом белка. [30]
Страницы: 1 2 3