Заряд - белок
Cтраница 3
Таким образом, в отличие от Na 1 -формы происходит подкисление раствора. При ионофорезе с мембраной в Н - форме ( Р - 0 008 г) п 0 48, п п, что свидетельствует, по-видимому 6, о положительном заряде кожи в этих условиях. Действительно, в результате обмена рН раствора становится ниже, чем рН изоэлектри-ческой точки белков кожи ( 4 3 - 4 8), а в этих условиях заряд белков может изменить знак. [31]
Исследовано количество ( р) салицилат-ионов, вводимых в процессе ионофореза в кожу как в условиях, обычных для физиотерапевтической практики, так и с применением катиони-товой мембраны, отделяющей раствор салицилата Na от гидрофильной прокладки. Установлено, что применение мембраны в Н - форме увеличивает р более чем в 2 раза, в то время как для мембраны в NaT-форме это увеличение не столь значительно. Эффективность мембраны в Н - форме обусловлена не только задеряшой посторонних ( паразитарных) ионов и ограничением диффузии iсалицилат - ионов в прокладку, но и нейтрализацией продуктов гидролиза в процессе обмена ионов, а также изменением заряда белков кожи ( вследствие уменьшения рН) в направлении, благоприятном для введения анионов. [32]
Растворы высокомолекулярных соединений ( биополимеров) в отличие от дисперсных систем являются более устойчивыми. Устойчивость их определяется зарядом и гидратацией. С гидрофильностью белков связана их способность самопроизвольно растворяться и их устойчивость. Для образования заряда белков не требуется присутствия стабилизатора, так как белки являются полиэлектролитами. [33]
Так как поверхность белковой глобулы доступна для растворителя как в иативном, так и в денатурированном состоянии, денатурация должна, следовательно, приводить к понижению коэффициентов активности внутренних боковых групп белка, которые становятся доступными для растворителя. Диссоциацию и растворение белков можно рассматривать таким же образом, относя коэффициенты активности к поверхностным участкам, доступность которых для растворителя меняется в этих процессах. В случае осаждения, однако, имеется осложняющий фактор, состоящий в том, что состав твердой фазы может не быть постоянным. Так, осаждение трихлорацетатом и перхлоратом в кислом растворе, вероятно, сопровождается связыванием этих анионов катионными белками, что приводит к уменьшению заряда белка и в результате этого к осаждению его в виде комплекса с солью. До тех пор, пока состав обеих фаз остается постоянным, объяснение вызываемых солью процессов денатурации, осаждения и агрегации сводится к определению, у каких боковых групп изменяются коэффициенты активности ( или растворимость) в присутствии данной соли. [34]
Принципиально должна существовать также возможность использования в КЗЭ испытанного в классическом электрофорезе и в жидкостной хроматографии анионного ПАВ ДДСН. Однако в систематических исследованиях кислых белков оказывается, что добавка ДДСН в количествах от ррт до одного процента к пробе и к буферу приводит к очень неопределенным результатам. В общем случае не улучшается ни эффективность, ни селективность, а даже наблюдается некоторое ухудшение этих характеристик. Возможным объяснением этого может быть хорошо известное действие денатурации, оказываемое ДДСН на белок. Наряду с этим, в наблюдаемой потере селективности большую роль играет, конечно, адсорбция ПАВ на биомолекулах и связанное с этим появление заряда пробы. Первоначальная структура заряда белков может полностью исчезнуть или перекрываться этим эффектом, так что разделение в электрическом поле произойдет только лишь по адсорбированным зарядам детергентов. [36]
Характеристические константы не зависят от заряда всей макромолекулы, однако величины констант, измеряемые на опыте, от заряда зависят. При низких значениях рН суммарный заряд белка положителен, что вызывает отталкивание протонов и приводит к снижению определяемой для отдельных групп величины р / Са по сравнению с ожидаемой при обычных условиях величиной. При высоких значениях рН возникает обратная ситуация, когда опытные величины рКа становятся относительно завышенными. В обоих случаях степень искажений зависит от суммарного заряда белка, уменьшаясь с возрастанием ионной силы. Обычно искажение величины рКа не превышает 1 5 единицы. Расчет рН в ходе титрования можно было бы производить, устанавливая соответствующие значения p & int для групп каждого класса, а затем производя суммирование для всех классов при условии, если этому не мешают электростатические эффекты, обусловленные изменением заряда белка. Отсюда ясно, что уравнение ( V. В него необходимо ввести поправочный член, позволяющий учесть влияние указанного электростатического эффекта на ход титрования. [37]
Ионообменная хроматография заключается в ионном обмене между полимером, заполнившим колонку, и заряженным белком, пропускаемым через колонку. Различают два типа ионообменников. Катионообменник - КМ-целлюлоза - это полимер целлюлозы, к которой по ОН-группе пришита карбоксиметильная группа. Затем пропускаем через колонку катионы белка. Они вытесняют Na и занимают его место. Прочность связи ( электростатической) зависит от величины положительного заряда, т.е. числа ионизированных МН3 - групп. Предварительная обработка анионообменника щелочью или кислотой приводит к образованию солевой формы. Ионы С1 - или ОН - обмениваются на анионы белка. В случае ионного обмена прочность связи белка с ионитом определяется величиной заряда белка. Для разделения кислых и нейтральных белков используют анионообменники, для разделения основных белков - катионообменники. [38]
Первичная структура белка определяется числом и последовательностью ковалентно связанных аминокислот. Полипептидная цепь благодаря водородным связям, образующимся между кислородными атомами карбонильных групп и азотными атомами амидных групп, приобретает вторичную структуру; она может образовать спиральную конфигурацию ( а-спираль) или конфигурацию так называемого складчатого слоя. Третичной структурой называют определенное пространственное расположение пептидной цепи, обусловленное взаимодействием между различными ее боковыми группами. В поддержании третичной структуры участвуют другие водородные связи, ионные связи и неполярные ( гидрофобные) взаимодействия. Поперечные связи, соединяющие различные участки полипептидной цепи, могут быть и ковалентными; таковы, например, дисуль-фидные связи, образующиеся при окислении SH-груцп. И наконец, благодаря взаимодействиям нескольких полипептидных цепей могут возникать надмолекулярные агрегаты. Такое строение ( при котором белок состоит из определенного числа полипептидных цепей, или субъединиц) называют четвертичной структурой. При физиологических условиях белок находится в водной фазе. Поэтому между белками и диполями воды тоже имеет место взаимодействие. Факторы, вызывающие изменение заряда белков ( концентрации ионов Н, Са2, Mg2, К и др.), неизбежно влияют также на степень гидратации, а тем самым и на степень набухания белков. [39]
Страницы: 1 2 3