Молекулярная активность

Cтраница 3

Помимо чисто кинетического значения, в исследовании механизма действия фермента, эта константа имеет существенное значение для определения возможной скорости ферментативной реакции в физиологических условиях. Как уже указывалось выше, оценка молекулярной активности аце-тилхолинэстеразы нервной ткани особенно важна, поскольку этот фермент участвует в физиологических процессах, протекающих с очень большой скоростью. Так как молекулярная активность может быть вычислена, если известны максимальная скорость реакции и молярная концентрация фермента ( каталитических центров), то при исследовании холинэстераз особое внимание было обращено на разработку методов определения их концентрации. Встретившиеся здесь трудности связаны с тем, что холинэстеразы пока не удалось получить в кристаллическом состоянии и точно измерить их молекулярный вес. [31]

Для оценки действия различных ферментов введено понятие молекулярной активности, которая определяется числом молекул субстрата, превращающихся под действием одной молекулы фермента в одну минуту. Самым активным из известных ферментов является карбоангидраза, молекулярная активность которой составляет - 36 млн. молекул в минуту. [32]

Однако изложенные выше методы не позволяют получать вполне индивидуальные холинэстеразы достаточной для определения молекулярного веса степени чистоты, что в значительной степени затрудняет прямое определение молекулярной активности. В связи с этим были разработаны специальные методы измерения молекулярной активности, основанные на использовании специфических ингибиторов. [33]

Из данных рисунка видно, что только при определенной концентрации ингибитора зависимость 1 / с / Я от t является линейной. Вычисленная на основании найденной концентрации фермента и скорости гидролиза ацетилхолина величина молекулярной активности холинэстеразы оказалась равной 7 - Ю4 мин. [34]

Иная картина наблюдается при рассмотрении данных по кинетике ферментативного гидролиза эфиров тиохолина. По сравнению с гидролизом холиновых эфиров этот процесс характеризуется меньшими величинами константы Михаэлиса и большими значениями молекулярной активности. Таким образом, не только сродство эфиров тиохолина к активной поверхности холинэстераз, но также и константа скорости распада фермент-субстратных комплексов выше, чем у эфиррв холина. [35]

Первыми из выделенных оксистероид-дегидрогеназ были ферменты из адаптированных к тестостерону клеток Pseudomonas testosteroni: За - и Зр 17р - оксистероид-дегидрогеназы [127, 128]; недавно появилось сообщение [129] об улучшении метода разделения этих ферментов с применением гелевой фильтрации. Определенный седиментационным методом молекулярный вес За-оксистероид-дегидрогеназы равен 47100 1500, а Зр, 17р - оксистероид-дегидрогеназы - 100000 600; молекулярная активность первого фермента равна 9300 мин. С), а второго - 18600 мин. [36]

Если реакция между ферментом и ингибитором отвечает указанным выше требованиям, то эта зависимость должна быть линейной. Если активность фермента после завершения реакции с ингибитором определяется в оптимальных условиях ( рН, температура, концентрация субстрата, насыщающая фермент), то тангенс угла полученной прямой дает величину молекулярной активности фермента. [37]

Активность каталитического центра выражается числом молекул субстрата, превращаемых в одну минуту одним каталитическим центром. Эту величину можно определить, если фермент обладает характерной простатической группой или каталитическим центром, концентрация которого доступна измерению. Активность каталитического центра совпадает с молекулярной активностью, если молекула фермента содержит один каталитический центр; если на молекулу фермента приходится п каталитических центров, то величина молекулярной активности в п раз больше активности каталитического центра. [39]

Константы Михаэлиса для некоторых ферментов. [40]

Еще более сложный вид имеют ур-ння кинетики двухсубстратных ферментативных реакций, в особенности обратимых реакций, в к-рых фермент-субстратные комплексы претерпевают многостадийные превращения. Однако в значительном числе случаев, исследуя зависимость начальной скорости реакции от концентрации субстрата, оказывается возможным вычислить основные кпнетич. Нетрудно видеть, что эта величина представляет собой молекулярную активность фермента. Величина константы Михаэлиса даже для простейших ферментативных реакций более сложна для интерпретации, поскольку определяется соотношением трех констант скорости. Кт представляет константу диссоциации комплекса ES на Е и S, к-рая в ферментативной кинетике наз. Константа субстрата служит мерой сродства фермента к субстрату ( сродство обратно пропорционально величине A s) и, следовательно, является важной мерой каталитич. [41]

Ферменты действуют чрезвычайно быстро. Их особенность состоит не только в том, что они способны заставить вступить в соответствующие реакции большие количества веществ ( медленно), но и резко ускорить эти реакции. О быстроте их действия можно судить по так называемой молекулярной активности, величине, показывающей число молекул субстрата ( или эквивалентов затронутой группы), которое превращает за 1 мин одна молекула ферментного белка. Молекулярная активность для многих ферментных белков достигает десятков и сотен тысяч, а для одного из них ( каталазы) - даже несколько миллионов. Это значит, что за 60 сек одна молекула катализатора обычно может заставить расщепиться, окислиться или измениться иным путем тысячи и десятки тысяч молекул субстрата. [42]

Михаэлиса константа для этого катиона составляет 5 - 10 - 5 М, молекулярная активность фермента 5 - 104 / мин. Ингибиторами фосфоглюкомутазы являются п-хлор-меркурибензоат и ионы тяжелых металлов ( Zn, Си), что указывает на важную роль SH-групп в поддержании каталитич. [43]

Номенклатура и классификация ферментов) - первый фермент, выделенный п кристаллич. Михаэлиса константа для мочевины, Km3 - lQ - 3 M при рН 7 0 и 25; молекулярная активность 4 66 106 мин. Ag, Hg, Си подавляют ее активность даже в мизерных количествах. [44]

Страницы: 1 2 3 4